RIPA 용해 완충액 만드는 법
세포·조직에서 단백질을 뽑는 가장 흔한 용해 완충액입니다. 핵·막 단백질까지 잘 녹입니다. 50 mM Tris-HCl pH 8.0, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% sodium deoxycholate, 0.1% SDS.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl (pH 8.0) | 2.5 mL | 50 mM |
| 5 M NaCl | 1.5 mL | 150 mM |
| NP-40 (또는 IGEPAL CA-630) | 500 µL | 1% |
| Sodium deoxycholate | 250 mg | 0.5% |
| 10% SDS | 500 µL | 0.1% |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- 물 약 700 mL(비율 맞춰)에 Tris·NaCl stock을 넣습니다.
- Sodium deoxycholate를 녹이고 NP-40과 10% SDS를 넣습니다 (거품 주의).
- 물로 최종 부피를 맞추고 4 °C에 보관합니다.
- 쓰기 직전에 protease inhibitor(필요하면 phosphatase inhibitor)를 넣습니다.
알아 둘 점
- Sodium deoxycholate는 빛에 약하니 어두운 병에 둡니다.
- RIPA에는 BCA 정량이 잘 맞지만, Bradford는 계면활성제 때문에 맞지 않습니다.
자주 묻는 질문
protease inhibitor를 미리 넣어 두면 안 되나요?
많은 inhibitor가 용액에서 몇 시간–며칠 안에 약해집니다. 쓸 만큼 덜어 그때그때 넣으세요.
단백질 상호작용(Co-IP)에도 RIPA를 쓰나요?
RIPA는 강해서 약한 결합이 끊어질 수 있습니다. Co-IP에는 NP-40이나 Triton만 든 부드러운 완충액을 씁니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.