4X Laemmli 샘플 버퍼 만드는 법
SDS-PAGE 전에 단백질 샘플과 3:1로 섞어 변성시키는 샘플 버퍼입니다. 250 mM Tris-HCl pH 6.8, 8% SDS, 40% glycerol, 0.02% bromophenol blue, 20% β-mercaptoethanol.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl (pH 6.8) | 2.5 mL | 250 mM |
| SDS | 800 mg | 8% |
| Glycerol | 4 mL | 40% |
| Bromophenol blue | 2 mg | 0.02% |
| β-mercaptoethanol (쓰기 직전) | 2 mL | 20% |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- Tris-HCl pH 6.8, SDS, glycerol, bromophenol blue를 섞고 물로 8 mL까지 맞춥니다 (β-ME 뺀 상태).
- 나눠서 실온 또는 −20 °C에 보관합니다.
- 쓰기 직전에 800 µL당 β-ME 200 µL(또는 DTT 최종 100–200 mM)를 넣습니다.
- 샘플 3 : 버퍼 1로 섞고 95 °C에서 5분 가열합니다.
알아 둘 점
- β-ME는 휘발성·독성이라 흄후드에서 다룹니다. 냄새가 싫다면 DTT를 씁니다.
⚠ 안전 β-mercaptoethanol은 독성이 있습니다. 흄후드에서 장갑을 끼고 다루세요.
자주 묻는 질문
2X나 6X로 만들 수도 있나요?
네. 각 성분을 같은 비율로 조정하면 됩니다. 6X는 SDS·glycerol이 진해 녹이기 어렵습니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.