BCA 단백질 정량
단백질이 구리 이온을 환원시키면 BCA가 보라색을 내는 원리로 농도를 잽니다. 알고 있는 농도의 표준(BSA)으로 곡선을 그리고, 샘플의 흡광도를 곡선에 대어 읽습니다.
핵심
- 샘플이 표준곡선 범위 안(가운데 쪽)에 들어오도록 희석
- 환원제(DTT·β-ME)·킬레이트제(EDTA)는 값을 부풀립니다
- 표준과 샘플은 같은 버퍼·같은 시간으로 반응
준비물
- BCA 시약 A · B
- BSA 표준 (2 mg/mL)
- 샘플과 같은 버퍼 (표준 희석·blank용)
- 투명한 96-well 플레이트
- 37°C 인큐베이터
- 562 nm 플레이트 리더
단계
- 💡 농도를 모르면 두 가지 희석을 함께 넣으세요.
계산
Working reagent (웰당 200 µL)
🔬 변수 탐색 — 바꾸면 무엇이 달라질까?
뼈대는 같아도 농도·시간·시약은 실험마다 바꿔 씁니다. 항목을 누르면 무엇에 영향을 주는지, 두 조건(A·B)을 나란히 놓으면 어떻게 달라지는지 볼 수 있습니다.
샘플 희석
무엇을 바꾸나샘플을 몇 배로 묽혀 넣을지. 측정값이 표준곡선 범위 안에 있어야 믿을 수 있습니다.
덜 희석하면덜 희석: 가장 진한 표준보다 높아 곡선 밖으로 나갑니다 (계산 불가·과소 추정).
더 희석하면너무 희석: 바닥 근처라 작은 오차가 크게 부풀려집니다.
보통 쓰는 값곡선의 가운데 쪽 (위 그래프의 초록 영역 안).
반응 온도 · 시간
무엇을 바꾸나색이 계속 진해지는 반응이라 온도와 시간이 감도와 범위를 바꿉니다.
낮추면 · 줄이면실온·짧게: 감도가 낮아 묽은 샘플이 잘 안 잡힙니다.
높이면 · 늘리면60°C·길게: 감도는 오르지만 진한 표준이 포화되어 범위가 좁아집니다.
보통 쓰는 값37°C 30분 — 표준과 샘플을 반드시 같은 조건으로.
버퍼 성분 (방해 물질)
무엇을 바꾸나lysis 버퍼 성분이 발색 반응을 방해할 수 있습니다.
보통 쓰는 값버퍼에 맞는 방법을 고르고, blank·표준도 같은 버퍼로.
표준 단백질
무엇을 바꾸나BSA 기준으로 구한 값은 "BSA와 비교한 상대 농도"입니다. 항체 샘플처럼 특수한 경우 IgG 표준을 쓰기도 합니다.
보통 쓰는 값실험 전체에서 같은 표준을 쓰면 샘플끼리 비교에는 문제없습니다.
문제 해결
| 문제 | 흔한 원인 | 해결 |
|---|---|---|
| 표준곡선 R²가 낮음 | 피펫 오차, 기포, 표준 희석 실수 | 표준을 새로 만들고, 기포 제거, 역피펫팅 |
| 샘플이 가장 진한 표준보다 높음 | 희석 부족 | 더 희석해 다시 측정 |
| blank까지 진한 보라색 | 환원제·킬레이트제가 반응 | 버퍼 확인, 희석으로 방해 물질 줄이기, 호환 키트 |
| 반복 웰끼리 차이가 큼 | 섞임 부족, 가장자리 증발 | 흔들어 섞고 뚜껑 덮기 |
⚠ 안전 시약 B에는 황산구리가 들어 있습니다 — 눈·피부에 닿지 않게 하세요.
이 페이지는 널리 쓰이는 일반 조건을 정리한 것입니다. 시약·키트·항체 설명서와 소속 기관의 안전 규정을 우선하세요. 시뮬레이터 중 "개념 그림"은 경향을 보여 주는 단순 모델입니다.
결과 정리는 무료 도구로:
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