핵 추출 완충액 (고염, buffer C) 만드는 법
세포질을 뺀 핵 침전물에서 핵 단백질을 고염으로 뽑아내는 완충액입니다. 20 mM HEPES pH 7.9, 420 mM NaCl, 1.5 mM MgCl₂, 0.2 mM EDTA, 25% glycerol.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 1 M HEPES-KOH (pH 7.9) | 200 µL | 20 mM |
| 5 M NaCl | 840 µL | 420 mM |
| 1 M MgCl₂ | 15 µL | 1.5 mM |
| 0.5 M EDTA | 4 µL | 0.2 mM |
| Glycerol | 2.5 mL | 25% |
| 1 M DTT (쓰기 직전) | 5 µL | 0.5 mM |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- DTT를 뺀 성분을 물과 섞어 4 °C에 보관합니다.
- 쓰기 직전에 DTT와 protease inhibitor를 넣습니다.
- 핵 침전물에 넣고 얼음 위에서 30분 가끔 vortex합니다.
- 최고 속도로 10–15분 원심분리한 상등액이 핵 추출물입니다.
자주 묻는 질문
EMSA나 ChIP에도 쓸 수 있나요?
네. 이 방법(Dignam 계열)은 원래 전사인자 결합 실험(EMSA)용으로 만들어졌습니다. 필요하면 투석해 염을 낮춥니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.