세포질 추출 완충액 (저장성, buffer A) 만드는 법
핵·세포질 분획의 첫 단계에서 세포를 부풀려 세포막만 깨는 저장성 완충액입니다. 10 mM HEPES pH 7.9, 10 mM KCl, 1.5 mM MgCl₂, 0.5 mM DTT.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 1 M HEPES-KOH (pH 7.9) | 500 µL | 10 mM |
| 1 M KCl | 500 µL | 10 mM |
| 1 M MgCl₂ | 75 µL | 1.5 mM |
| 1 M DTT (쓰기 직전) | 25 µL | 0.5 mM |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- DTT를 뺀 성분을 물과 섞어 4 °C에 보관합니다.
- 쓰기 직전에 DTT와 protease inhibitor를 넣습니다.
- 세포를 얼음 위에서 10–15분 부풀린 뒤 NP-40을 최종 0.3–0.6% 넣고 vortex해 세포막을 깹니다.
- 원심분리(수천 g, 1분)한 상등액이 세포질, 가라앉은 것이 핵입니다.
알아 둘 점
- 분획이 잘 됐는지 세포질 표지(GAPDH·tubulin)와 핵 표지(lamin B1·histone H3)로 웨스턴에서 확인합니다.
자주 묻는 질문
NP-40을 넣지 않으면 안 되나요?
부푼 세포를 가는 바늘이나 Dounce 균질기로 깨는 방법도 있습니다. 세포막이 깨졌는지 현미경으로 확인하세요.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.