2X Laemmli 샘플 버퍼 만드는 법
샘플과 1:1로 섞는 SDS-PAGE 샘플 버퍼입니다. 125 mM Tris-HCl pH 6.8, 4% SDS, 20% glycerol, 10% β-mercaptoethanol, 0.004% bromophenol blue.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl (pH 6.8) | 1.25 mL | 125 mM |
| SDS | 400 mg | 4% |
| Glycerol | 2 mL | 20% |
| Bromophenol blue | 0.4 mg | 0.004% |
| β-mercaptoethanol (쓰기 직전) | 1 mL | 10% |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- β-ME를 뺀 성분을 섞고 물로 9 mL(10 mL 기준)까지 맞춥니다.
- 나눠서 실온 또는 −20 °C에 보관합니다.
- 쓰기 직전에 900 µL당 β-ME 100 µL(또는 DTT 최종 100 mM)를 넣습니다.
- 샘플과 1:1로 섞고 95 °C에서 5분 가열합니다.
알아 둘 점
- bromophenol blue 0.4 mg은 달기 어려우니 1% 용액 40 µL를 넣으면 편합니다.
- 샘플이 묽을 때는 4X를 써서 부피를 아낍니다.
⚠ 안전 β-mercaptoethanol은 독성이 있습니다. 흄후드에서 다루세요.
자주 묻는 질문
막 단백질도 95 °C로 끓이나요?
다중 막관통 단백질은 끓이면 뭉칠 수 있어 37 °C 30분이나 70 °C 10분을 씁니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.