IP 용해 완충액 (Co-IP용) 만드는 법
면역침강(IP·Co-IP)에서 단백질 결합을 지키며 세포를 녹이는 부드러운 완충액입니다. 25 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40, 5% glycerol.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl (pH 7.4) | 1.25 mL | 25 mM |
| 5 M NaCl | 1.5 mL | 150 mM |
| 0.5 M EDTA | 100 µL | 1 mM |
| NP-40 (또는 IGEPAL CA-630) | 500 µL | 1% |
| Glycerol | 2.5 mL | 5% |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- 물에 모든 stock과 NP-40·glycerol을 넣고 섞습니다.
- 물로 최종 부피를 맞춥니다.
- 4 °C에 보관합니다.
- 쓰기 직전에 protease inhibitor(필요하면 phosphatase inhibitor)를 넣습니다.
알아 둘 점
- 결합이 약하면 NaCl을 100 mM으로 줄이거나 NP-40을 0.5%로 낮춥니다. 배경이 높으면 반대로 올립니다.
자주 묻는 질문
세척 완충액은 따로 만드나요?
보통 같은 완충액(또는 NP-40을 0.1%로 낮춘 것)으로 씻습니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.