Bradford 단백질 정량 시약 (직접 만들기) 만드는 법
Coomassie G-250이 단백질과 붙으면 595 nm 흡광이 올라가는 원리의 정량 시약입니다. 100 mg Coomassie G-250, 95% 에탄올 50 mL, 85% 인산 100 mL / 1 L.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| Coomassie Brilliant Blue G-250 | 50 mg | 0.01% |
| 95% 에탄올 | 25 mL | 4.75% |
| 85% 인산 (H₃PO₄) | 50 mL | 8.5% |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- Coomassie G-250을 에탄올에 녹입니다.
- 인산을 넣고 물로 최종 부피를 맞춥니다.
- 종이 필터(Whatman 1번)로 거르고 갈색 병에 실온 보관합니다 (수 주).
알아 둘 점
- 샘플 5–10 µL + 시약 200–250 µL(96웰), 5분 뒤 595 nm를 읽고 BSA 표준곡선과 비교합니다.
- SDS·Triton 같은 계면활성제가 있으면 값이 틀어집니다. RIPA 샘플은 BCA를 쓰세요.
⚠ 안전 진한 인산은 부식성입니다. 장갑·보안경을 쓰세요.
자주 묻는 질문
표준곡선이 직선이 아니에요.
Bradford는 원래 넓은 범위에서 휘어집니다. 좁은 범위만 쓰거나 2차 곡선으로 맞추세요 (표준곡선 도구가 자동으로 고릅니다).
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.