웨스턴 블랏 transfer 완충액 (Towbin) 만드는 법
젤의 단백질을 막으로 옮기는 wet transfer용 완충액입니다. 25 mM Tris, 192 mM glycine, 20% methanol.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| Tris base | 3.03 g | 25 mM |
| Glycine | 14.4 g | 192 mM |
| Methanol | 200 mL | 20% (v/v) |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- Tris와 glycine을 물 약 700 mL에 녹입니다.
- Methanol을 넣고 물로 1 L를 맞춥니다.
- 4 °C로 차갑게 해서 씁니다.
알아 둘 점
- 큰 단백질(>150 kDa)은 methanol을 10% 이하로 줄이고 SDS를 0.0375–0.1%까지 넣으면 잘 옮겨집니다.
- 10X를 만들 때는 methanol 없이 Tris·glycine만 진하게 만들고, 쓸 때 methanol을 넣습니다.
⚠ 안전 Methanol은 독성·인화성입니다. 환기가 되는 곳에서 다루세요.
자주 묻는 질문
methanol은 왜 넣나요?
단백질에서 SDS를 벗겨 막에 잘 붙게 하고 젤이 부풀지 않게 합니다. 대신 큰 단백질이 젤에서 잘 빠지지 않게 됩니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.