TFB1 (RbCl competent cell 용액 1) 만드는 법
Hanahan RbCl 방법으로 고효율 화학적 competent 대장균을 만드는 첫 번째 용액입니다. 30 mM KOAc, 100 mM RbCl, 10 mM CaCl₂, 50 mM MnCl₂, 15% glycerol, pH 5.8.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 아세트산칼륨 | 588 mg | 30 mM |
| RbCl | 2.42 g | 100 mM |
| CaCl₂·2H₂O | 294 mg | 10 mM |
| MnCl₂·4H₂O | 1.98 g | 50 mM |
| Glycerol | 30 mL | 15% |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- 최종 부피의 약 80% 물에 녹입니다.
- 묽은 아세트산으로 pH 5.8을 맞춥니다.
- 물로 최종 부피를 맞춥니다.
- 0.22 µm 필터로 거릅니다. (고압멸균하면 망간이 침전) 4 °C 보관.
알아 둘 점
- pH가 6을 넘으면 갈색 MnO₂ 침전이 생깁니다. 갈색이 되면 버립니다.
- OD600 0.4–0.5까지 키운 세포를 얼음에 식혀 TFB1(배양액의 1/3 부피)에 풀고 → TFB2(1/25 부피)로 옮깁니다.
자주 묻는 질문
RbCl이 없으면?
KCl로 바꾸면 효율이 조금 낮지만 대부분의 클로닝에는 충분합니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.