PCR로 insert 양 끝에 제한효소 자리를 붙이는 primer를 만듭니다. 구조: 여분 염기 + 효소 자리 + (선택: Kozak) + insert와 붙는 부분. 효소는 vector의 MCS에 있고 insert 안에는 없는 것으로 고르세요.
Gibson·In-Fusion·HiFi 조립은 insert 양 끝에 vector 끝과 같은 서열(겹침)을 붙여, 효소가 서로 이어 붙이게 합니다. vector를 어디서 열지(한 번만 자르는 효소) 고르면 겹침 primer를 만들어 줍니다.