조직 용해 완충액 (Proteinase K, genotyping) 만드는 법
동물 꼬리·귀 조직을 proteinase K로 녹여 genotyping PCR용 DNA를 얻는 완충액입니다. 100 mM Tris pH 8.5, 5 mM EDTA, 0.2% SDS, 200 mM NaCl.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl (pH 8.5) | 5 mL | 100 mM |
| 0.5 M EDTA (pH 8.0) | 500 µL | 5 mM |
| 10% SDS | 1 mL | 0.2% |
| 5 M NaCl | 2 mL | 200 mM |
| Proteinase K 20 mg/mL (쓰기 직전) | 250 µL | 100 µg/mL |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- proteinase K를 뺀 성분을 섞어 실온에 보관합니다.
- 쓰기 직전에 proteinase K를 넣고 조직(2–5 mm)당 300–500 µL를 넣습니다.
- 55 °C에서 밤새 녹이고, 원심분리한 상등액에서 이소프로판올로 DNA를 침전시킵니다.
알아 둘 점
- PCR에 바로 쓰려면 SDS가 방해가 되므로 침전·세척하거나, SDS 없이 Tween-20 0.45%·NP-40 0.45%를 쓰는 변형법을 씁니다.
자주 묻는 질문
더 빠른 방법은 없나요?
HotSHOT(알칼리 가열) 방법은 30분 안에 PCR용 DNA를 얻습니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.