웨스턴 블랏 stripping 완충액 (강한 조건, β-ME) 만드는 법
약한 stripping으로 안 떨어지는 항체를 떼어 내는 조건입니다. 62.5 mM Tris-HCl pH 6.8, 2% SDS, 100 mM β-mercaptoethanol, 50 °C.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl (pH 6.8) | 6.25 mL | 62.5 mM |
| 10% SDS | 20 mL | 2% |
| β-mercaptoethanol (쓰기 직전) | 700 µL | 100 mM |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- Tris와 SDS를 물과 섞어 두고, 쓰기 직전에 흄후드에서 β-ME를 넣습니다.
- membrane을 담가 50 °C에서 30분 흔듭니다.
- TBST로 5분씩 5–6번 충분히 씻어 β-ME를 없앱니다.
- 다시 blocking하고 새 1차 항체를 붙입니다.
알아 둘 점
- stripping 후 ECL만 발라 신호가 없어졌는지 먼저 확인하세요.
- 단백질도 일부 떨어지므로 stripping 전후 신호를 정량 비교하지 않습니다.
⚠ 안전 β-ME는 독성과 냄새가 강합니다. 흄후드에서 다루고 가열도 흄후드 안에서 하세요.
자주 묻는 질문
약한 stripping과 어떤 걸 먼저 쓰나요?
먼저 약한 조건을 쓰고, 안 떨어질 때만 이 조건을 씁니다. PVDF가 nitrocellulose보다 잘 견딥니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.