실험 프로토콜
널리 확립된 기본 실험을 단계별 체크리스트로 정리했습니다. 각 프로토콜의 "변수 탐색"에서 젤 농도, 항체 희석, 주형 양, 분주 비율 같은 조건을 바꾸면 결과가 어떻게 달라지는지 두 조건을 나란히 놓고 비교할 수 있습니다.
🧪 단백질
단백질을 분리·정량·검출하는 실험
웨스턴 블랏 SDS-PAGE → transfer → 검출단백질을 크기로 나눈 뒤(SDS-PAGE) 막으로 옮기고(transfer) 항체로 특정 단백질만 찾아내는 방법입니다. 뼈대는 거의 같지만 젤 %, 로딩 양, 항체 희석, transfer 조건은 실험마다 바꿔 씁니다 — 아래 "변수 탐색"에서 바꾸면 무엇이 달라지는지 비교해 보세요.⏱ 1.5~2일🔬 변수 7 · 시뮬레이터 5 · 비교표 2BCA 단백질 정량단백질이 구리 이온을 환원시키면 BCA가 보라색을 내는 원리로 농도를 잽니다. 알고 있는 농도의 표준(BSA)으로 곡선을 그리고, 샘플의 흡광도를 곡선에 대어 읽습니다.⏱ 45분~1시간🔬 변수 4 · 시뮬레이터 1 · 비교표 1샌드위치 ELISA바닥에 붙인 포획 항체(capture)와 검출 항체(detection) 사이에 표적 단백질을 끼워 잡고, 효소 발색으로 양을 재는 방법입니다. 표준곡선이 S자 모양이라 샘플이 곡선의 가운데에 오도록 희석하는 것이 핵심입니다.⏱ 4~5시간 (키트) · 코팅 포함 1~2일🔬 변수 5 · 시뮬레이터 1 · 비교표 1
🧬 핵산 · PCR
RNA 추출부터 cDNA·qPCR까지
RNA 추출 페놀·구아니딘 방식세포를 페놀·구아니딘 시약으로 녹이고 클로로포름으로 층을 나누면 RNA는 위쪽 투명한 수용액 층에 남습니다. 이를 이소프로판올로 가라앉혀 모읍니다. RNase를 막는 것과 층을 섞지 않는 것이 전부입니다.⏱ 약 1.5시간🔬 변수 5 · 시뮬레이터 1 · 비교표 1cDNA 합성 역전사역전사 효소로 RNA를 DNA(cDNA)로 바꾸는 단계입니다. qPCR의 모든 샘플이 같은 조건에서 전환되어야 비교가 공정해지므로, 샘플마다 같은 양의 RNA를 넣고 같은 master mix를 쓰는 것이 핵심입니다.⏱ 약 1시간🔬 변수 4 · 시뮬레이터 0 · 비교표 1SYBR Green qPCRDNA가 두 배씩 불어날 때 SYBR 염료의 형광이 커지는 것을 매 cycle 재서, 형광이 기준선을 넘는 cycle(Ct)로 처음 양을 비교합니다. 주형 양은 2배 줄면 Ct가 약 1 늦어집니다.⏱ 약 2시간🔬 변수 5 · 시뮬레이터 2 · 비교표 0
🧫 세포 배양 · 세포 실험
세포 키우기·보관과 세포 기반 실험
부착 세포 계대배양용기가 세포로 차면 떼어 내어 일부만 새 용기로 옮깁니다. 얼마나 나누는지(분주 비율)에 따라 다음에 나눌 날이 정해지고, trypsin을 얼마나 오래 두느냐에 따라 세포 상태가 달라집니다.⏱ 20~30분🔬 변수 4 · 시뮬레이터 1 · 비교표 0세포 동결 · 해동세포는 "천천히 얼리고 빨리 녹이는" 것이 원칙입니다. DMSO가 얼음 결정을 막아 주지만 그 자체로 독성이 있어, 녹이자마자 희석해 없애야 합니다.⏱ 동결 30분 + 하룻밤 · 해동 15분🔬 변수 5 · 시뮬레이터 0 · 비교표 1MTT · CCK-8 세포 생존율살아 있는 세포의 대사 효소가 시약을 색 있는 물질로 바꾸는 양을 재어 생존율을 비교합니다. 대조군의 흡광도가 너무 약하거나 포화되지 않도록 세포 수와 반응 시간을 맞추는 것이 핵심입니다.⏱ 3~4일 (손 작업 1~2시간)🔬 변수 5 · 시뮬레이터 1 · 비교표 1세포 면역형광 염색세포를 고정하고 막에 구멍을 낸 뒤 항체로 표적을 찾아 형광으로 봅니다. 어떤 고정·투과 방법이 맞는지는 표적 단백질마다 달라서, 처음엔 두 방법을 나란히 비교해 보는 것이 좋습니다.⏱ 1~2일🔬 변수 5 · 시뮬레이터 1 · 비교표 1
시약·키트·항체 설명서와 소속 기관의 안전 규정을 항상 우선하세요.