MTT · CCK-8 세포 생존율
살아 있는 세포의 대사 효소가 시약을 색 있는 물질로 바꾸는 양을 재어 생존율을 비교합니다. 대조군의 흡광도가 너무 약하거나 포화되지 않도록 세포 수와 반응 시간을 맞추는 것이 핵심입니다.
핵심
- 대조군 OD가 선형 범위(약 0.3~2.0) 안에 오게
- 가장자리 웰은 PBS로 채우기
- 용매만 넣은 vehicle 대조군 필수
준비물
- 96-well 플레이트 (투명)
- 세포, 배지
- 약물 stock (DMSO 등에 녹임)
- MTT (5 mg/mL in PBS) + DMSO, 또는 CCK-8 (WST-8) 시약
- 플레이트 리더 (MTT 570 nm, CCK-8 450 nm)
단계
- 💡 분주하는 동안 현탁액을 자주 섞어야 웰마다 세포 수가 고릅니다.
- 💡 시약 계산기의 "약물 stock"과 "연속 희석" 탭으로 부피를 계산하세요.
🔬 변수 탐색 — 바꾸면 무엇이 달라질까?
뼈대는 같아도 농도·시간·시약은 실험마다 바꿔 씁니다. 항목을 누르면 무엇에 영향을 주는지, 두 조건(A·B)을 나란히 놓으면 어떻게 달라지는지 볼 수 있습니다.
세포 수 · 반응 시간
무엇을 바꾸나흡광도는 세포 수와 반응 시간에 비례하다가 어느 순간 포화됩니다.
줄이면적게·짧게: 대조군 OD가 낮아 약물 효과 차이가 잘 안 보입니다.
늘리면많게·길게: 대조군이 포화되어 독성이 실제보다 약하게 보입니다.
보통 쓰는 값대조군 OD 약 0.3~2.0. 새 세포는 세포 수를 몇 단계로 깔아 먼저 확인.
시약 종류
무엇을 바꾸나세포 대사를 재는 방식.
보통 쓰는 값일상 실험은 CCK-8, 세포가 아주 적으면 ATP 발광법.
가장자리 효과
무엇을 바꾸나바깥쪽 웰은 증발이 빨라 값이 한쪽으로 치우칩니다.
가장자리를 쓰면가장자리를 샘플로 쓰면: 같은 조건인데도 바깥 웰만 값이 다릅니다.
보통 쓰는 값바깥 한 줄은 PBS·배지만, 인큐베이터 습도 유지.
용매(DMSO) 농도
무엇을 바꾸나약물을 녹인 용매가 웰에 들어가는 비율.
높이면높으면: 용매만으로 생존율이 떨어져 약물 효과가 과장됩니다.
보통 쓰는 값모든 웰에 같은 DMSO %, 보통 0.1~0.5% 이하.
약물 농도 범위
무엇을 바꾸나IC50을 양쪽에서 감싸야 곡선이 안정적으로 맞습니다.
좁게 잡으면좁게: 곡선의 위·아래 평탄 부분이 없어 IC50이 불안정합니다.
보통 쓰는 값3~10배 간격 8~10단계로 "효과 없음"부터 "완전 억제"까지.
문제 해결
| 문제 | 흔한 원인 | 해결 |
|---|---|---|
| 대조군 OD가 너무 낮음 | 세포 적음, 반응 시간 짧음 | 세포 수↑ 또는 반응 시간↑ |
| OD가 포화 (> 2.5) | 세포 많음, 반응 길게 | 세포 수↓, 반응 시간↓ |
| 반복 웰 편차가 큼 | 세포를 고르게 안 뿌림, 기포, 가장자리 | 섞으면서 분주, 기포 제거, 가장자리 비우기 |
| 낮은 농도에서 생존율이 100%를 넘음 | 기준을 blank·배지로 잡음, 약한 증식 자극 | vehicle을 100%로, 곡선 상단을 100으로 고정하지 않기 |
⚠ 안전 MTT와 약물은 독성이 있을 수 있고, DMSO는 피부 흡수를 돕습니다 — 장갑을 끼세요.
이 페이지는 널리 쓰이는 일반 조건을 정리한 것입니다. 시약·키트·항체 설명서와 소속 기관의 안전 규정을 우선하세요. 시뮬레이터 중 "개념 그림"은 경향을 보여 주는 단순 모델입니다.
결과 정리는 무료 도구로:
IC50 계산기 → 약물 stock · DMSO % 계산 → 연속 희석 계산 →