0.25% Trypsin-EDTA 만드는 법
부착 세포를 바닥에서 떼어 내는 효소 용액입니다. 0.25% trypsin, 1 mM EDTA. 약한 세포는 0.05%로 묽혀 씁니다.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| Trypsin (1:250 분말) | 250 mg | 0.25% |
| 0.5 M EDTA (pH 8.0) | 200 µL | 1 mM |
| 1X PBS (Ca²⁺·Mg²⁺ 없음) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- Ca²⁺·Mg²⁺ 없는 PBS(또는 HBSS)에 trypsin을 천천히 녹입니다.
- EDTA를 넣고 pH 7.2–7.6을 확인합니다.
- 0.22 µm 필터로 거릅니다.
- 나눠서 −20 °C에 두고, 녹인 것은 4 °C에서 1–2주 씁니다.
알아 둘 점
- 세척에서 혈청을 충분히 없애야 합니다. 혈청 속 α1-antitrypsin이 trypsin을 막습니다.
- 떼어 낸 뒤 혈청이 든 배지를 넣어 trypsin을 멈춥니다.
⚠ 안전 세포를 다루는 용액은 생물안전작업대(클린벤치) 안에서 멸균 상태로 다룹니다.
자주 묻는 질문
37 °C에서 몇 분 두나요?
보통 2–5분입니다. 10분 넘게 두면 표면 단백질이 손상되니, 현미경으로 세포가 둥글게 떠오르는지 보며 정합니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.