TMB 기질 용액 (직접 만들기) 만드는 법
HRP가 파란색으로 바꾸는 ELISA 기질입니다. 쓰기 직전에 만듭니다. TMB 0.1 mg/mL, 인산-시트르산 pH 5.0, H₂O₂.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| TMB 1 mg/mL (DMSO에 녹임) | 1 mL | 0.1 mg/mL |
| 0.05 M 인산-시트르산 완충액 pH 5.0 | 9 mL | |
| 30% H₂O₂ (쓰기 직전) | 2 µL | 약 0.006% |
만드는 순서
- TMB 1 mg을 DMSO 1 mL에 녹입니다.
- 인산-시트르산 완충액 9 mL에 넣고 섞습니다.
- 쓰기 직전에 30% H₂O₂ 2 µL를 넣고 웰당 100 µL씩 넣습니다.
- 어두운 곳에서 5–30분 반응시키고 같은 부피의 정지 용액을 넣어 450 nm를 읽습니다.
알아 둘 점
- 만든 용액이 이미 파랗다면 오염(금속·HRP)된 것이니 버립니다.
- 시판 1-성분 TMB는 더 안정하고 배경이 낮습니다.
⚠ 안전 TMB와 DMSO는 피부에 닿지 않게 장갑을 끼세요.
자주 묻는 질문
아자이드가 든 완충액과 함께 써도 되나요?
안 됩니다. sodium azide는 HRP를 억제해 신호가 사라집니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.