4% SDS-PAGE 농축젤 (stacking gel) 만드는 법
분리젤 위에 붓는 4% 농축젤입니다. 샘플을 얇은 띠로 모아 밴드를 선명하게 합니다. 5 mL로 미니 젤 약 2장.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 물 | 3.05 mL | |
| 0.5 M Tris-HCl pH 6.8 | 1.25 mL | 125 mM |
| 10% SDS | 50 µL | 0.1% |
| 30% 아크릴아마이드/bis (29:1) | 665 µL | 4% |
| 10% APS (새로 만든 것) | 25 µL | 0.05% |
| TEMED | 5 µL | 0.1% |
만드는 순서
- 물·Tris·SDS·아크릴아마이드를 섞습니다.
- APS와 TEMED를 넣고 굳은 분리젤 위에 붓습니다.
- 바로 comb을 꽂고 20–30분 굳힙니다.
알아 둘 점
- comb을 뺀 뒤 well을 전기영동 완충액으로 헹궈 굳지 않은 아크릴아마이드를 없애면 밴드가 곧습니다.
⚠ 안전 아크릴아마이드 단량체는 신경독입니다. 장갑을 끼고, 가루보다 시판 용액을 쓰세요. 굳은 젤은 비교적 안전합니다.
자주 묻는 질문
농축젤이 안 굳어요.
APS가 오래됐을 가능성이 큽니다. 10% APS는 4 °C에서 1–2주, 얼리면 더 오래 갑니다. 산소도 굳는 것을 막으니 너무 세게 섞지 마세요.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.