SA-β-gal 노화 염색 용액 (pH 6.0) 만드는 법
노화 세포에서 늘어나는 β-galactosidase 활성을 pH 6.0에서 파랗게 보는 염색 용액입니다 (senescence-associated β-gal).
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 0.2 M 시트르산/인산나트륨 완충액 pH 6.0 | 2 mL | 40 mM |
| Potassium ferrocyanide (K₄Fe(CN)₆·3H₂O) | 21.1 mg | 5 mM |
| Potassium ferricyanide (K₃Fe(CN)₆) | 16.5 mg | 5 mM |
| NaCl | 87.7 mg | 150 mM |
| 1 M MgCl₂ | 20 µL | 2 mM |
| X-gal 20 mg/mL (DMF) | 500 µL | 1 mg/mL |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- X-gal을 뺀 성분을 물에 녹이고 pH 6.0을 확인합니다.
- 쓰기 직전에 X-gal을 넣습니다.
- 세포를 2% 포름알데히드 + 0.2% glutaraldehyde로 3–5분 고정하고 PBS로 씻습니다.
- 염색 용액을 넣고 37 °C, CO₂ 없는 배양기에서 12–16시간 둡니다.
알아 둘 점
- 0.2 M 시트르산/인산 완충액 pH 6.0: 0.1 M 시트르산 36.85 mL + 0.2 M Na₂HPO₄ 63.15 mL.
- CO₂ 배양기에 두면 pH가 떨어져 정상 세포도 파래집니다.
⚠ 안전 X-gal 용매(DMF)는 독성이 있습니다. 장갑을 끼세요.
자주 묻는 질문
너무 오래 두면?
24시간을 넘기면 정상 세포도 옅게 물들 수 있습니다. 대조군과 같은 시간으로 비교하세요.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.