pNPP 기질 완충액 (diethanolamine, AP용) 만드는 법
alkaline phosphatase(AP) ELISA에서 pNPP 기질을 녹이는 완충액입니다. 1 M diethanolamine, 0.5 mM MgCl₂, pH 9.8. 405 nm 노란색.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| Diethanolamine (액체, 밀도 1.097) | 9.58 mL | 1 M |
| 1 M MgCl₂ | 50 µL | 0.5 mM |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- diethanolamine을 물(최종 부피의 약 70%)과 섞습니다 (점성이 있으니 무게 105.1 g으로 달아도 됨).
- MgCl₂를 넣고 HCl로 pH 9.8을 맞춥니다.
- 물로 최종 부피를 맞춥니다.
- 빛을 가려 4 °C에 보관합니다.
- 쓰기 직전에 pNPP를 1 mg/mL로 녹여 웰당 100 µL, 15–30분 뒤 405 nm를 읽습니다 (정지: 3 M NaOH 50 µL).
알아 둘 점
- 인산 완충액(PBS)은 AP를 억제하므로 AP 검출 단계 전에는 TBS로 씻습니다.
⚠ 안전 diethanolamine은 자극성이 있습니다. 장갑·보안경을 쓰세요.
자주 묻는 질문
HRP와 AP 중 무엇이 좋나요?
HRP가 빠르고 흔합니다. AP는 신호가 시간에 따라 직선으로 늘어나 반응 시간 조절이 쉽고, 시료에 peroxidase가 많을 때 유리합니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.