면역형광 blocking 용액 (5% 정상 혈청) 만드는 법
면역형광·면역조직화학에서 비특이 결합을 막는 용액입니다. PBS + 5% 정상 혈청 + 0.3% Triton X-100. 항체 희석에도 씁니다.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| 정상 혈청 (2차 항체를 만든 동물) | 500 µL | 5% |
| 10% Triton X-100 | 300 µL | 0.3% |
| 1X PBS | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- PBS에 혈청과 Triton을 넣고 섞습니다.
- 그날 쓰거나 4 °C에 1–2일 둡니다.
- 세포·절편에 넣고 실온 1시간 둡니다 (씻지 않고 1차 항체로).
알아 둘 점
- 혈청은 2차 항체를 만든 동물과 같게 합니다 (goat anti-rabbit 2차 → normal goat serum).
- 혈청 대신 1–3% BSA를 써도 됩니다.
자주 묻는 질문
1차 항체와 같은 동물 혈청을 쓰면?
2차 항체가 혈청 속 IgG에 붙어 배경이 크게 올라갑니다. 피하세요.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.