His-tag 단백질 용해 완충액 (10 mM imidazole) 만드는 법
Ni-NTA로 His-tag 단백질을 정제할 때 세포를 녹이는 완충액입니다. 50 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| NaH₂PO₄·H₂O | 3.45 g | 50 mM |
| NaCl | 8.77 g | 300 mM |
| Imidazole | 340 mg | 10 mM |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- 모든 성분을 최종 부피의 약 80% 물에 녹입니다.
- NaOH로 pH 8.0을 맞춥니다 (imidazole이 pH를 바꾸므로 넣은 뒤에 맞춤).
- 물로 최종 부피를 맞춥니다.
- 필터로 거르고 4 °C에 보관합니다.
알아 둘 점
- Ni-NTA 정제 3종: 용해 10 mM → 세척 20 mM → 용출 250 mM imidazole. 비특이 결합이 많으면 세척 농도를 20–40 mM으로 올립니다.
- EDTA·DTT는 니켈을 빼앗으므로 넣지 않습니다 (필요하면 β-ME 최대 20 mM).
자주 묻는 질문
imidazole의 A280 흡광이 문제가 되나요?
고농도 imidazole은 280 nm에서 흡광합니다. 같은 완충액을 blank로 쓰거나 BCA·Bradford로 정량하세요.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.