2X HBS (인산칼슘 transfection용, pH 7.05) 만드는 법
인산칼슘 transfection에서 DNA-CaCl₂ 용액과 섞어 고운 침전을 만드는 완충액입니다. 50 mM HEPES, 280 mM NaCl, 1.5 mM Na₂HPO₄, pH 7.05.
🧮 부피 계산기
| 성분 | 넣을 양 | 최종 농도 (1X) |
|---|---|---|
| HEPES (자유산) | 1.192 g | 50 mM |
| NaCl | 1.636 g | 280 mM |
| Na₂HPO₄ (무수) | 21.3 mg | 1.5 mM |
| 물 (증류수) | 최종 부피까지 |
만드는 순서
- 최종 부피의 약 80% 물에 녹입니다.
- NaOH로 pH를 정확히 7.05로 맞춥니다 (±0.05가 효율을 크게 바꿈).
- 물로 최종 부피를 맞춥니다.
- 0.22 µm 필터로 거릅니다. 나눠서 −20 °C에 보관합니다.
알아 둘 점
- DNA + 물 + 2.5 M CaCl₂(최종 250 mM) 용액을 같은 부피의 2X HBS에 한 방울씩 넣고, 20분 뒤 세포에 뿌립니다.
- pH 6.95·7.05·7.12로 몇 병을 만들어 가장 잘 되는 것을 고르는 실험실이 많습니다.
자주 묻는 질문
침전이 너무 굵게 생겨요.
pH가 높거나 섞은 뒤 너무 오래 두었을 가능성이 큽니다. 고운 안개 같은 침전이 좋습니다.
널리 쓰이는 표준 조성입니다. 시약의 수화물 형태·순도에 따라 양이 달라질 수 있으니 병 라벨의 분자량(FW)을 확인하고, 소속 기관의 안전 규정과 제조사 설명서를 따르세요.