부착 세포 계대배양
용기가 세포로 차면 떼어 내어 일부만 새 용기로 옮깁니다. 얼마나 나누는지(분주 비율)에 따라 다음에 나눌 날이 정해지고, trypsin을 얼마나 오래 두느냐에 따라 세포 상태가 달라집니다.
핵심
- 70~90% 찼을 때 나누기
- trypsin은 떨어지는 즉시 중화
- 계대 번호를 꼭 기록
준비물
- 완전 배지 (37°C로 데움)
- PBS (Ca²⁺·Mg²⁺ 없음)
- Trypsin-EDTA (0.05~0.25%)
- 새 플라스크·dish, 원심 튜브
- 혈구계 또는 자동 세포 계수기
- 생물안전작업대
단계
🔬 변수 탐색 — 바꾸면 무엇이 달라질까?
뼈대는 같아도 농도·시간·시약은 실험마다 바꿔 씁니다. 항목을 누르면 무엇에 영향을 주는지, 두 조건(A·B)을 나란히 놓으면 어떻게 달라지는지 볼 수 있습니다.
분주 비율
무엇을 바꾸나몇 분의 일만 새 용기로 옮기는가. 비율이 클수록 다시 차는 데 오래 걸립니다.
적게 나누면1:2처럼 적게: 금방 차서 자주 나눠야 합니다.
많이 나누면1:10 이상 많이: 너무 드물어 늦게 자라거나 잘 안 붙는 세포가 있습니다.
보통 쓰는 값세포마다 다름 — 2~4일 뒤 80%가 되는 비율.
trypsin 시간 · 농도
무엇을 바꾸나세포를 바닥에서 떼어 내는 효소 처리.
짧게짧게: 덜 떨어져 뭉치고, 잘 떨어지는 세포만 골라 옮겨집니다.
길게길게: 표면 단백질이 손상되고 생존율·부착이 떨어집니다.
보통 쓰는 값떨어지면 바로 중화 (보통 2~5분).
나눌 때 confluence
무엇을 바꾸나바닥이 세포로 덮인 비율.
낮추면 · 줄이면50% 미만: 세포 수가 적고 회복이 느립니다.
높이면 · 늘리면100%로 오래: 접촉 억제·분화·세포 죽음이 늘고, 뭉쳐서 잘 안 떨어집니다.
보통 쓰는 값70~90%, 로그 성장기일 때.
계대 번호
무엇을 바꾸나몇 번째 나눈 세포인지.
높아지면높으면: 유전적·형질 변화가 쌓여 약물 반응·발현이 달라질 수 있습니다.
보통 쓰는 값낮은 계대 stock을 얼려 두고, 정해 둔 범위 안에서만 실험. 논문에 계대 범위를 적습니다.
문제 해결
| 문제 | 흔한 원인 | 해결 |
|---|---|---|
| 세포가 잘 안 떨어짐 | 너무 빽빽함, 혈청 잔여 | PBS로 헹구기, trypsin 시간 약간↑, 스크레이퍼는 마지막 수단 |
| 분주 후 잘 안 붙음 | 과한 trypsin, 너무 드문 분주 | trypsin 시간↓, 분주 비율↓ |
| 배지가 탁하고 노랗게 변함 | 세균·곰팡이 오염 | 폐기, 작업대·인큐베이터 소독 |
| 자라는 속도가 느려짐 | 높은 계대, 마이코플라스마 | 새 stock 해동, 마이코플라스마 검사 |
⚠ 안전 세포주에 맞는 생물안전등급 작업대에서 다루고, 사람 유래 세포는 잠재적 감염원으로 취급하세요.
이 페이지는 널리 쓰이는 일반 조건을 정리한 것입니다. 시약·키트·항체 설명서와 소속 기관의 안전 규정을 우선하세요. 시뮬레이터 중 "개념 그림"은 경향을 보여 주는 단순 모델입니다.
결과 정리는 무료 도구로:
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