세포 동결 · 해동

⏱ 동결 30분 + 하룻밤 · 해동 15분난이도 쉬움🔬 조건 비교 1

세포는 "천천히 얼리고 빨리 녹이는" 것이 원칙입니다. DMSO가 얼음 결정을 막아 주지만 그 자체로 독성이 있어, 녹이자마자 희석해 없애야 합니다.

핵심

로그 성장기의 건강한 세포를 얼리기
−1°C/분으로 천천히 얼리기
37°C에서 1~2분 안에 녹이고 바로 DMSO 제거

준비물

동결 배지 (예: 90% FBS + 10% DMSO)
Cryovial
서서히 얼리는 용기 (−1°C/분)
−80°C 냉동고, 액체질소 탱크
37°C 수조
데운 완전 배지

단계

동결

로그 성장기(70~90%) 세포를 계대배양과 같은 방법으로 떼어 냅니다.
세포 수를 세고 200~300 ×g 5분 원심합니다. 5분
차가운 동결 배지에 1×10⁶~5×10⁶개/mL로 풀어 vial당 1 mL씩 나눕니다.
서서히 얼리는 용기에 넣어 −80°C에 하룻밤 둡니다. 하룻밤
다음 날 액체질소 탱크(기상)로 옮기고 위치·계대·날짜·세포 수를 기록합니다.

해동

37°C 수조에서 1~2분, 작은 얼음 조각이 남을 때까지 흔들며 녹입니다. 1~2분
겉을 70% 에탄올로 닦고, 데운 배지 9 mL에 한 방울씩 천천히 옮깁니다.
200 ×g 5분 원심해 DMSO가 든 배지를 버리고 새 배지로 풀어 배양합니다. 5분
다음 날 붙은 상태를 확인하고 배지를 갈아 줍니다.

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🔬 변수 탐색 — 바꾸면 무엇이 달라질까?

뼈대는 같아도 농도·시간·시약은 실험마다 바꿔 씁니다. 항목을 누르면 무엇에 영향을 주는지, 두 조건(A·B)을 나란히 놓으면 어떻게 달라지는지 볼 수 있습니다.

문제 해결

문제	흔한 원인	해결
해동 후 생존율 낮음	빨리 얼림, 천천히 녹임, DMSO에 오래 노출	서서히 얼리는 용기, 빠른 해동, 바로 원심
해동 후 잘 안 붙음	세포 수 부족, 손상	더 작은 용기에 배양, 다음 날 배지 교환
vial이 터지거나 뚜껑이 튐	액체질소 액상 보관 중 질소가 스며듦	기상(vapour phase) 보관, 녹일 때 보안경

⚠ 안전 액체질소는 동상과 질식 위험이 있습니다 — 보안경·저온 장갑을 쓰고 환기되는 곳에서 다루세요. 액상에 보관한 vial은 녹일 때 터질 수 있습니다.

이 페이지는 널리 쓰이는 일반 조건을 정리한 것입니다. 시약·키트·항체 설명서와 소속 기관의 안전 규정을 우선하세요. 시뮬레이터 중 "개념 그림"은 경향을 보여 주는 단순 모델입니다.

결과 정리는 무료 도구로:

세포 계수 · vial 수 계산 →