FISH 신호 카운팅과 비율 계산

1. 왜 대조 probe와 비율을 쓰나

세포 전체의 염색체 수가 늘어난 경우(배수성 변화)에도 표적 신호는 많아집니다. 같은 염색체의 대조 probe(예: 동원체 probe)로 나누면, 염색체 수 변화와 유전자 자체의 증폭을 구분할 수 있습니다.

2. 숫자 예시

비율과 함께 핵당 평균 신호 수도 보고하는 것이 좋습니다. 판정 기준값(cut-off)은 검사와 probe마다 다르므로, 임상 판독은 해당 검사의 가이드라인을 따라야 합니다. 이 글과 도구는 연구용 정량을 돕기 위한 것입니다.

3. 카운팅 규칙

• 겹치지 않고 경계가 온전한 핵만 셉니다. 잘린 핵이나 겹친 핵은 제외합니다.
• 세는 핵 수를 미리 정합니다(보통 20–100개). 한 영역만 보지 말고 여러 영역에서 고르게 셉니다.
• 크기와 모양이 비슷한 점만 신호로 봅니다. 아주 가깝게 붙은 두 점(신호 지름 정도 이내)은 하나로 세는 것이 일반적입니다.
• 신호가 너무 많아 뭉쳐 있으면(cluster, HSR) 개수를 셀 수 없습니다. 추정값으로 따로 기록합니다.

4. 여러 색 probe와 겹친 신호

빨강과 초록 신호가 겹치면 노랑(fusion)으로 보입니다. 전좌 검출용 probe(fusion·break-apart)에서는 이 겹침과 분리 자체가 판독 대상입니다. Aqua나 Gold 같은 추가 색을 쓸 때는 색이 섞인 가장자리가 다른 색으로 잘못 세어지지 않도록 주의해야 합니다.

DAPI(파랑) 핵 위의 빨강 신호는 화면에서 분홍빛으로 보일 수 있습니다. 합성 이미지보다 채널별 원본 이미지로 세면 이런 혼동이 줄어듭니다. (현미경 이미지 내보내기)